توضیحات

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

  مقاله الکتروفورز در فایل ورد (word) دارای 22 صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است

فایل ورد مقاله الکتروفورز در فایل ورد (word)  کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه  و مراکز دولتی می باشد.

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی مقاله الکتروفورز در فایل ورد (word)،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد


بخشی از متن مقاله الکتروفورز در فایل ورد (word) :

الکتروفورز

امروزه الكتروفورز شاید اصلی ترین تكنیك برای جداسازی ملكولها در آزمایشگاه‌های سلولهای زیستی است. زیرا تكنیك قدرتمندی است و هنوز به طور معقولانه ای آسان و ارزان است و خیلی آسان و پیش پا افتاده شده است. علی رغم بسیاری از آرایش های فیزیكی برای دستگاه ها و صرف نظر از محیطی كه ملكولها اجازه مهاجرت در آن دارند جداسازی با الكتروفورز به توزیع بار در ملكولی كه جداسازی می شود بستگی دارد. الكتروفورز می تواند یك بعدی یا دو بعدی باشد. الكتروفورز یك بخشی برای جداسازی اغلب پروتئین‌های روتین و اسید نوكلئیك استفاده می شود. بخش دوم الكتروفورز برای جداسازی پروتئین هایی كه در اثر انگشت هستند استفاده می شود. محیط كمكی برای الكتروفورز می تواند در ژل در لوله یا در ورقه های صاف خوابیده تشكیل شود لوله ها برای جداسازی یك بعدی استفاده می شوند و زمانی كه ورقه ها فضای سطحی بلندی را اشغال می كنند برای جداسازی دو بعدی بهترند. شكل 1-4 نوعی واحد الكتروفورز ورقه ای تخت را نشان می دهد. زمانی كه دیترجنت SDS سدیم دو دسیل سولفات با پروتئین ها استفاده می شود، همه پروتئین ها دارای بار منفی می شوند به وسیله وابستگی به آنیون سدیم دودسیل سولفات در زمان جدا سازی با ژل پلی آكریلامید طرز عمل و رویه با پلی آكریلامید ژل الكتروفورز خلاصه می شود این تكنیك برای تعیین وزن مولكولی استاندارد شده است. ژل های پلی آكریلامید از پلیمریزه كردن دو تركیب تشكیل شده اند. آكریلامید و N , N متیلن بیس آكریلامید.

بیس در اینجا عامل پیوند دهنده برای ژل هاست. پلیمریزاسیون با اضافه كردن آمونیوم پرسولفات در زمانی كه همچنین دی متیل آمینوپرپیونیتریل یا N , N , N , N تترامتیل اتیل اندیامین آغاز می شود. ژل ها خنثی و هیدروفیل هستند و شبكه سه بعدی از هیدروكربن های طولانی كه به وسیله گروه های متیلن به هم وصل شده اند تشكیل شده است جداسازی ملكول ها در ژل بستگی به اندازه منفذها و سوراخهای تشكیل شده در ژل دارد. اندازه سوراخهای ژل به وسیله دو فاكتور تعیین می شوند. %T كه مقدار درصد آكریلامید را نشان می دهد. %30 كه مقدار درصد پیوند دهنده را نشان می دهد. هر چه مقدار كل آكریلامید افزایش یابد اندازه منفذ ژل كاهش می یابد. پیوند دهنده های با 5% C كوچكترین اندازه منفذ را می دهد. هر افزایش یا كاهش در %C باعث افزایش در اندازه منفذ می شود. كل آكریلامید داده شده بعنوان نسبت درصد وزن به حجم از آكریلامید+بیس آكریلامید است.

پروتئین ها با وزن مولكولی در محدوده ده هزار یا یك میلیون با 2/71% ژل های آكریلامید جداسازی می شوند. زمانی كه پروتئین ها با وزن ملكولی بالاتر نیازمند تمركز ژل آكریلامید پایین تر هستند برعكس ژل های 30% برای جداسازی پلی پپتیدهای كوچك استفاده می شود.
تمركز بیشتر ژل باعث كوچكتر شدن اندازه منفذ ژل و جداسازی بهتر ملكولهای كوچك می شود. درصد ژل مورد استفاده بستگی به وزن مولكولی پروتئین مورد جداسازی دارد.
ژل های 5درصد برای پروتئین هایی در محدوده 60000 تا 200000 دالتون استفاده می شوند. ژل های ده درصد برای پروتئین های 16000 تا 70000 دالتون استفاده می شوند و ژل های پانزده درصد برای پروتئین های 12000 تا 45000 دالتون استفاده می شوند.

سیستم های كاتیونی و آنیونی
در الكتروفورز پروتئین ها در یك بار پایه جداسازی می شوند و بار پروتئین می تواند مثبت یا منفی باشد.بسته به PH بافر. در عملیات معمولی ستون حاوی ژل قیمت بندی شده در سه قسمت شامل: 1- ژل جدا كننده 2- ژل توده شده 3- ژل نمونه . ژل نمونه ممكن است حذف بشود و نمونه از طریق غلیظ شدن محیط غیر هدایتی مانند ساكاروز به وجود بیاید. الكترودها به دو انتهای ستون متصل می شوند و جریان الكتریكی از طریق ژل جزءبندی شده عبور می كند. اگر الكترودها به صورت بالا آرایش پیدا كنند حمام بالایی كاتد و حمام پایین آند (+) است.
آنیون ها اجازه دارند كه به سمت آند بروند و به این سیستم آنودی می گویند. كاتیون ها اجازه دارند كه به سمت كاتد بروند و به این سیستم كاتدی می گویند.

سیستم های لوله ای و ورقه ای
در طراحی پروتكل الكتروفورز دو سیستم نزدیك به هم طراحی شده است یكی ستون الكتروفورز كه از ژلهای لوله مانند در لوله های شیشه ای تشكیل شده است و دیگری ژل های تخت كه از ژل تخت بین دو صفحه شیشه ای تشكیل شده است. مزایای ژل های تیوبی در حركت ملكولها از طریق ژل ها كمتر مستعد و مهیاست تا حركت افقی و بنابراین گسترش آرامی در تجزیه و تحلیل باندها به خصوص در پروتئین ها وجود دارد و از نظر اقتصادی هم به صرفه است زیرا نسبتا آسان است برای ساختن این سیستم می توان در خانه از مواد قابل دسترس استفاده كرد.

با وجود اینكه ژل های تخت مزایایی دارند كه اجازه می دهند برای تجزیه های دو بعدی از آنها استفاده شود جدا كردن چندین نمونه به طور همزمان در یك ژل وجود دارد. ژل های تخت طوری طراحی شده اند كه چندین راه باریك دارند كه نمونه ها به طور موازی حركت كنند. اندازه و تعداد راه ها می تواند مختلف باشد زمانی كه نمونه ها در یك محیط حركت می كنند كمترین همانندی نمونه های مختلف منجر به تغییرات جزئی در ساختار ژل می شود. ژل تخت تكنیكی برای تجزیه های لكه‌ای و تجزیه های اتورادیوگرافیك است. نتیجتا برای عملیات آزمایشگاهی روزمره مثل تجزیه نوكلئیك اسیدها و كنترل های آنتی ژنی ژل های تخت مناسبند. قابلیت استفاده و قیمت تجاری ژل تخت باعث استفاده بیشتر از اینها شده و به ندرت از ژل لوله ای استفاده می شود. تئوری و عملیات ژل تخت با ژل لوله ای الكتروفورز یكسان است و این كه از كدام سیستم استفاده كنیم بستگی بیشتر به تجهیزات موجود دارد.

سیستم های ژل دنباله دار و بدون دنباله
استفاده اصلی از ژل ها بعنوان محیط جدا كننده كه شامل استفاده از یك ژل با پوشش PH است. مولكولها به وسیله حركتشان در پایه از طریق ماتریكس ژل تنها جدا می شوند این سیستم امروزه فقط گاهی در آزمایشگاهها استفاده می شود. و با سیستم های ژل چندتایی بدون دنباله جایگزین شده است. در سیستم های ژل چندتایی ژل جدا كننده به ژل توده ای و ژل نمونه انتخابی اضافه می شود. این ژل ها می توانند تجمع متفاوتی در یك محیط كمكی داشته باشند. یا ممكن است به طور كلی عامل های متفاوتی داشته باشند. تفاوت كلیدی در جداسازی ملكولها زمانی كه آن ها به ژل جدا كننده وارد می شوند است ژل جدا كننده تجمع خواهند كرد. این منطقه در ژل توده كننده در محدوده میكرون تا میلیمتر است. زمانی كه پروتئینها در باندهای تجمع توده می شوند آنها به مهاجرت ادامه می دهند برای رسیدن به ژل جداكننده تا باندهای باریك تشكیل دهند. باندها سپس از یكدیگر جدا می شوند.

ژل PH بدون دنباله
ابتدا باندهای پروتئین به ژل جدا كننده وارد می شوند جداسازی باندها با یون های عبوری از طریق ستون ژل در جفت افزایش می یابد هر یون در این جفت دارای پلاریته بار یكسان مانند پروتئین هستند. ولی متفاوت در بزرگی بار هستند. یك یون بزرگی بار بیشتی از پروتئین دارد. در حالی كه دیگری بزرگی بار كمتری از پروتئین دارد. یونی كه بار بیشتری دارد تندتر حركت می كند و بنابراین یون رهبر خواهد بود و یون با بار كمتر یون دنباله رو خواهد بود در سیستم های آنیونی یونهای كلر و گلیسینات از مخزن بافر (تریس گلیسین) مشتق می شوند یون رهبر معمولا كلر و گلیسینات یون دنباله رو است طرح این سیستم آنیونی در شكل 4-3 نمایش داده شده است. یون كلر اول به ژل جدا كننده وارد می شود و به سرعت از ژل خارج می شوند سپس پروتئین و بعد یون گلیسینات یون گلیسینات پروتئین را خارج می سازد و در آخر یك پوشش گرادیان ولتاژ خطی با ژل می سازد. پروتئین ها سپس خودشان را با این شیب بر طبق بار و اندازه شان جور می كنند.

ژل های آگارز
زمانی كه ژل های آكریلامید برای تجزیه پروتئین ها استاندارد شدند آنها كمتر برای اسیدهای نوكلئیك با وزن مولكولی بالا مناسب بوده اند به این منظور برای جداسازی مناسب این مولكولهای بزرگ تجمع آكریلامید نیاز به كاهش تا سطحی كه مایع باقی بماند دارد.
ژلها می توانند تشكیل بشوند با وجود اینكه آگارز اضافه شود (آگارز یك پلی ساكارید طبیعی است) برای كاهش تجمع آكریلامید. با اضافه كردن آگارز تجمع آكریلامید 5% می شود و می توان برای ملكولهای با وزن ملكولی بالاتر از 10 دالتون جداسازی كرد. این روش مخصوصا برای جداسازی ترتیب طولانی از DNA مفید است. امروزه ژل های آگارز- آكریلامید به طور گسترده در آزمایش‌گاه‌های ژنتیك برای تعیین نقشه ژن ها استفاده می شود این فصل بروی جداسازی پروتئین ها متمركز است.

ترمینولوژی برای تكنیكهای تجزیه ای، مهاجرت الكترونی با لوله موئینه:
تكنیهای مهاجرت الكترونی با لوله موئینه به طور افزاینده ای در شیمی تجزیه محبوب و مهم شده اند به خصوص در بیوتجزیه . بعضی از ترمینولوژی های وابسته در كاغذ یافت می شوند در ترمینولوژی الكتروفورز در شیمی كلینیكی. اما در بسیاری از موارد اینها برای تكنیكها كاپیلاری كاربردی نیستند و در تعاریف آیوپاك به حساب نمی آیند. در 1994 آقای KNOX مقاله ای را در زمینه تكنیكهای جداسازی الكترونی منتشر كرد اما این مقاله هماهنگ با فهرست علائم كروماتوگرافی آیوپاك نبود مقاله جاری بحث می كند و تعریف می كند جمله های وابسته مورد نیاز در تامین جاری، شامل نامهای تكنیكهای مختلف كه در اصول مهاجرت الكترونی استفاده می شود و آن باید مورد توجه قرار بگیرد كه تعداد موارد مرزی موجود با ترتیب و احترام به نامگذاری تكنیك های مخصوص اقدام كند. جداسازی با تكنیك های مهاجرت الكترونی كاپیلاری در لوله موئینه باریك به وسیله اعمال میدان الكتریكی قوی به دست می آید این تكنیكها شامل كاپیلاری الكتروفورز و مشتقات تكنیكهای مهاجرت الكترونی كاپیلاری است كه بر پایه اصول جداسازی متفاوت اند.

در بعضی موارد این اصول دارای هم پوشانی هستند. میسلار كاپیلاری الكتروفورز برای جداسازی یونهای كوچك آلی و معدنی و پلیمرها رنگها، منفجر كننده ها، پروتئینها، پپتیدها و اسیدهای نوكلئیك استفاده می شود. جریان الكترواسمز برای جداسازی همكاری می كنند اگر چه همیشه مورد نیاز نیست. جریان الكتروسمز از تاثیر میدان الكتریكی بر روی بارها در قسمت پخش شده در لایه دوگانه در سطح داخلی كاپیلاری به وجود می آیند برای مثال در كاپیلاری فیوز سیلیكا در برخورد با بافر در PH بالای 2 سطح گروه های سیلانول دپروتونه شده و پروتون از دست می دهند و دیواره كاپیلاری بار منفی پیدا می كند. این گروه ها اتمسفر یونی را بالا می برند كاربرد میدان الكتریكی در كاپیلاری باعث می شود یونهای دارای بار مثبت به سمت كاتد حركت كنند و آنیونها به سمت آند حركت كنند مزایای الكترواسمز شامل موارد زیر است:

1- جداسازی خوب است
2- زمان جداسازی كوتاه است
3- مقدار نمونه مورد نیاز بسیار كم است
4- هزینه تجزیه ای كم است

برای دریافت اینجا کلیک کنید

سوالات و نظرات شما

برچسب ها

سایت پروژه word, دانلود پروژه word, سایت پروژه, پروژه دات کام,
Copyright © 2014 cpro.ir
 
Clicky